Citotoxicidad del cadmio en hepatocitos de ratón albino y sus posibles implicaciones en ambientes tropicales / Cadmium citotoxicity in mice hepatocytes and implications on tropical environments

We analyzed phenotypic, structural and ultrastructural alterations induced by Cd+2 in hepatocytes extracted from Swiss Albino mice. Cadmium was given orally in watery solution of CdCl2 during 100 days at concentrations of 50 ppm, 100 ppm and 150 ppm. In controls, distilled water alone was used. The samples were processed with the paraffin inclusion and hematoxilin-eosin coloration techniques for light microscopy. For transmission electron microscopy we used the conventional technique. We found phenotypic (size and weight differences) and physiologic changes (muscular weakness, unrest); at the structural level we noticed loss of trabecular disposition and of lobulillar architecture, lymphocyte agglomeration, vacuolization, dilatation of sinusoid and central vein, among others. The ultrastructural study evidenced alterations coincident with those seen with light microscopy, which were accentuated with the increase of metal concentration: nucleolus with a high number of fibrillar centers (50 ppm); voluminous lipidic drops in the cytoplasm, loose endoplasmic rough reticulum, citoplasmatic vacuolization, altered lisosomes and peroxisomes (100 ppm); contracted nuclei with condensed cromatine, dilatation of intracellular space and mitochondria, and loss of fibrillar areas (150 ppm). Cadmium produces a toxic effect in the hepatic cells; the effect is more severe at higher concentration, leading to cellular necrosis.

Se realizó un análisis de las alteraciones fenotípicas, estructurales y ultraestructurales inducidas por Cd+2 en hepatocitos de ratón albino suizo. El metal fue suministrado vía oral en solución acuosa de CdCl2 durante 100 días a concentraciones de 50 ppm, 100 ppm y 150 ppm, en los controles la solución de cadmio fue sustituida por agua destilada. Las muestras fueron procesadas utilizando la técnica de inclusión en parafina y teñidas con hematoxilina- eosina para microscopía óptica y por la técnica convencional para microscopía electrónica de transmisión. Identificamos cambios fenotípicos (diferencias entre talla y peso) y fisiológicos (debilidad muscular e intranquilidad); a nivel histológico, pérdida de la disposición trabecular y de la arquitectura lobulillar, focos de aglomerados linfocíticos, vacuolización, dilatación de sinosoides y de la vena central. El estudio ultraestructural señala diversas alteraciones tales como: nucléolo con un elevado número de centros fibrilares (50 ppm); voluminosas gotas de lípidos en el citoplasma, retículo endoplasmático rugoso distendido, vacuolización citoplasmática, lisosomas y peroxisomas alterados (100 ppm); núcleos contraídos con cromatina condensada, dilatación en el espacio intracelular y áreas de pérdida mitocondrial y fibrilar (150 ppm). Sugerimos que el cadmio ejerce un efecto tóxico en las células hepáticas el cual se hace más severo con el aumento de la concentración, llevando a la necrosis celular.

Optimización del proceso de extracción de la lactasa de kluyveromyces marxianus ATTC 8554 para su aplicabilidad en la industria láctea / Optimization of the process of extraction of lactase from kluyveromyces marxianus ATTC 8554 for their applicability in the dairy industry

La lactasa o ß-galactosidasa (EC 3.2.1.23) es una enzima exclusivamente intracelular en Kluyveromyces marxianus ATCC 8554, por lo que para su liberación existen diversos métodos de extracción. El objetivo del presente trabajo consistió en optimizar el proceso de extracción de esta enzima para su uso en la industria láctea. La producción de la enzima fue inducida mediante el crecimiento de la levadura en un medio con lactosa como única fuente de carbono por 9 horas, donde alcanzó la fase logarítmica final de crecimiento. Se evaluó la combinación de los parámetros fisicoquímicos: temperaturas 30; 37 y 42°C; pH 6,5; 8,5 y 10 y tiempo 5; 10 y 20 horas con el método de extracción con tolueno al 2% en buffer fosfato 0,1 M. Se determinó la actividad enzimática de la lactasa a través del uso de un sustrato cromógeno el o-nitrophenyl-ß-D-galactopyranosido (ONPG) sobre los extractos libres de células. Se determinó la cantidad de proteínas totales por el método de Lowry, que permitió la valorización de la actividad específica. Los resultados fueron analizados empleando el paquete estadístico Statgraf versión 7.0, aplicando análisis de varianza trifactorial, LSD y prueba de Tukey. El análisis por microscopía electrónica de transmisión (MET de las células de K. marxianus reveló que el tolueno ejerce un efecto permeabilizante, liberando la enzima sin ruptura de la integridad celular. Se encontró un acortamiento significativo (P<=0,01) en el tiempo necesario para la extracción de la lactasa, siendo la mejor combinación: 37°C, pH 6,5 y 5 horas, generando en este tiempo la mayor cantidad de ONP: 0,4937 µmoles/mL/10 min y la mayor actividad específica 34,2095 Uß-gal/mg proteínas.